Desarrollo y validación de métodos analíticos para la cuantificación de antirretrovirales por HPLC

Resumen

Objetivo: Desarrollo, validación y caracterización de la función
del error de tres métodos analíticos mediante la técnica de
cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) para el análisis cuantitativo
de ritonavir, saquinavir y abacavir en plasma humano.
Método: Se han indicado los reactivos y aparatos empleados,
la preparación de los diferentes estándares de referencia, el procedimiento
de extracción desde la matriz biológica y las condiciones
de análisis ensayadas para la puesta a punto de los tres métodos
analíticos. Además, también se han descrito las metodologías de
validación y de obtención de la función del error analítico.
Resultados: Los métodos analíticos desarrollados para ritonavir,
saquinavir y abacavir en plasma humano fueron selectivos,
lineales (r2 > 0,99), precisos (coeficientes de variación < 15%) y
exactos (errores relativos < 15%) en el rango de concentraciones
seleccionado. La recuperación fue mayor del 95% en todos los
métodos. Los antirretrovirales estudiados fueron estables en las
condiciones ensayadas de acuerdo con la rutina del laboratorio.
La función del error discriminada para cada uno de los métodos
analíticos validados resultó ser lineal en saquinavir (DE = 4,84 +
7,14·10-2C) y abacavir (DE = -1,072 + 3,70·10-2C) y no lineal en
el caso de ritonavir (DE = 39,98 + 2,40·10-5C2).
Conclusiones: Se han desarrollado y posteriormente validado
tres métodos analíticos, encontrándose los parámetros de validación
dentro de las especificaciones y atributos de calidad establecidos. La
función del error de cada uno de los métodos validados puede
emplearse como método de ponderación heteroscedástica en la
estimación de parámetros mediante regresión no lineal en estudios
de farmacocinética clínica de los antirretrovirales ensayados.